Citotecnologia

Los avances Científicos
en el Diagnostico por
Citotecnología.
Lic. Noel Avalos.

Citotecnología.
Agrupa a las tecnólogos médicos del área
de anatomía patológica y laboratorio clínico,
que se dedican a la lectura del la citología
ginecológica y la no ginecológica, con el fin
de brindar tamizajes adecuados y óptimos
para contribuir a un diagnostico preciso.

Citotecnología.
O Citodiagnosis /Citodiagnóstico:también llamado
examen citológico o simplemente citología, es el
diagnóstico morfológico basado en los caracteres
microscópicos de células y componentes
extracelulares, desprendidos de los órganos
espontáneamente u obtenidos por procedimientos
que, en general, son menos invasivos que la
biopsia.
O Citogenética: Estudio de la estructura y función
de los cromosomas celulares.
O Citología: Parte de la biología que estudia la
célula.
O Citólogo/ga: Persona especializada en citología.

Tipos de estudios
citológicos:
O Citología vaginal: Citología de toma única
del fondo vaginal o de cérvix uterino.
O Citología triple toma (Wied): Cuando de
forma protocolizada se toman muestras de
fondo vaginal, cérvix uterino y de endocérvix.
O Citología endometrial: Cuando por métodos
de sondas o cánulas se realiza toma
endouterina.
O Citología de secreción: Cuando se obtiene
material citológico por medio de la expresión
de una glándula o zona anatómica.

Tipos de estudios
citológicos:
O Citología de excreción. Cuando se
realiza de residuos metabólicos, como la
orina.
O Citología por punción (PAAF). Cuando
se obtiene material citológico mediante
punción con aguja de una lesión
habitualmente no accesible externamente.
O Impronta. Cuando se obtienen células
por aproximación de un tejido u órgano al
portaobjetos.

CITOTECNÓLOGOS:
DEFINICIÓN Y FUNCIONES
O Es un técnico especialista en el area de
laboratorio patológico que examina las
células bajo el microscopio para detectar
anormalidades o pistas que indican que
una célula es maligna, premaligna o
enferma.

Funciones.
O Nº citología 60 en un lapso de 8 horas.
O Archivo
O Escribir informes
O Control de calidad
O Desarrollar la correlación de los casos
para aumentar la calidad del tamizaje
O Las funciones pueden cambiar
dependiendo del tipo de servicio ya sea
publico o privado

Citotecnólogos en El Salvador.
Se cuenta con un numero considerable de
ellos/as. No se realizar estudios de citología
extra-vaginal. Ya que esto es realizado por
el patólogo.
No se cuenta con una asociación, que
respalde el proceso legal de los mismo.
Para el control de calidad siempre se
necesita al patólogo para sellar el tamizaje.

Trabajo del Citotecnólogo/a
O Se realiza el Diagnostico precoz de
cáncer, como una herramienta
fundamental para evitar el cáncer servicio
uterino.
O Diagnóstico de vaginitis con estudio de
las células y los gérmenes.
O Valoración hormonal, pero muy pocas
veces se realiza.

Datos del CA de cervico
uterino en E.S.

En el Lab 2009 240
Central del
MSPAS 2008 290

Ins del CA 2005 517
Res de
Tumores 2006 258

VIRUS DEL PAPILOMA
HUMANO.
O Familia Papillomaviridae.
O Compuestos de ADN, de 8000 pares de
bases.

O Su estructura, es compartida por más de 100
tipos secuenciados hasta la fecha

O Su actividad transformante se explica
principalmente por la actividad de sus
oncoproteinas E6 y E7.

VIRUS DEL PAPILOMA
HUMANO.
O Virus sin envoltura
O Capside proteica
O Infecta sólo a células epiteliales.
O Son virus DNA compuestos por tres regiones.
O Región temprana E (Early), la cual codifica para las proteínas
virales (E1, E2, E4, E5, E6 y E7), necesarias para la replicación del
DNA viral, la regulación de la trascripción y la transformación e
inmortalización celular.
O Región Tardía L (Late), que codifica para proteínas estructurales
(L1 y L2).
O Region reguladora conocida como región larga de control LCR
(Long Control Región), que contiene la secuencia de DNA que
permiten el control de la replicación y de la expresión del genoma
viral.

VIRUS DEL PAPILOMA
HUMANO.

VPH.
O Los virus tipos 1, 3 y 5 pueden causar las
verrugas en piernas y brazos

O Los tipos 6 y 11 pueden provocar lesiones
verrugosas en los genitales masculinos y
femeninos.

O Los tipos 16, 18, 31, 33, 35, 45 y 58
pueden provocar alteraciones celulares en la
vagina y el cuello uterino; displasias y
representan casi el 95% de los casos de
canceres cervicouterinos en todo el mundo

Vacunas para contra el VPH.
Vacunas Profilácticas:
Inducen la formación de Anticuerpos
humorales que Neutralizan al VPH.
Vacuna tetravalente recombinante contra
los tipos 6, 11, 16 y 18.
O Ayudaría al sistema inmunológico a
reconocer y destruir el agente antes de
que la infección quede completamente
establecida

Estudios citológicos en El
Salvador.
O Se realizan las citologías cervico-uterinas
convencionales.
O Se han hecho estudios desde el 2002
para ver la sensibilidad y la especificidad
con la inspección visual de acido acético
(IVAA).
O Actualización de coloración de PAP,
propuesto por el JICA, en el 2010.
O Se esta tratando de introducir la citología
liquida a nivel del MSPAS pero esta en
proceso de prueba, el alto costo de
reactivos

Estudios citológicos en El
Salvador.
O No se realizan por parte de
citotecnólogos/as, lectura de citologías
extra-vaginal.
O En el ultimo simposio de prevención del
Cáncer Cervico-Uterino se habla de tomar
medidas para mejores los tamizajes de la
detección temprana del cáncer en nuestro
país.

Avances científicos en E.S
O El método IVAA.
O Se puede realizar una inspeccion visual
con Acido acetico al 3% o 5%.
O No se necesita de material especializado.
O Personas con capacitacion tecnica pueden
elaborarlo.
O Proporciona datos especificos en en un
65%

Avances científicos en E.S.
O Se trata de introducir la citología liquida a
nivel publico por las siguientes razones:
O Logra conservar el 100% de la muestra.
O Se pueden montar varias laminas por
paciente.
O No requiere equipo costoso para su
procesamiento.

Avances científicos en E.S.
O Limpia el 60% de la inflamación ,moco y
sangre.
O Incrementa en un 64.73% los diagnósticos
de lesiones intraepiteliales de bajo y alto
grado .
O Disminuye los diagnósticos inflamatorio en
un 31.3%
O Incrementa los diagnósticos negativos
para células malignas en un 34.6%

Que rumbo tomar en los A. C.
en E.S
O Realizar investigación científica, con la
ayuda de países cooperantes.
O Tener centros de formación permanente
en citología cervico-vaginal.
O Capacitar al personal de salud para
realizar citologías extra-vaginal.

APLICACIÓN DE LA
INMUNOCITOQUIMICA A LA
CITOLOGÍA.
O Las indicaciones de realización de técnicas
inmunocitoquimicas a los estudios citológicos son las
mismas que las de las biopsias:
O - Apoyo al diagnóstico y tipificación de tumores
indiferenciados.
O - Localización del tumor primario en lesiones
metastásicas.
O - Diferenciar los adenocarcinomas de los mesoteliomas.

APLICACIÓN DE LA
CITOLOGÍA.
O A diferencia de las biopsias, no existe estandarización
metodológica en la realización de la técnicas
inmunocitoquimicas en los estudios citológicos, por lo
que se debe ser muy prudente en la interpretación de los
resultados y siempre en un contexto clínico y
morfológico.

APLICACIÓN DE LA
INMUNOCITOQUIMICA A
LA CITOLOGÍA.
O Aunque la técnica se puede realizar sobre
extensiones directas procedentes de
citologías convencionales o de medio liquido,
ya sean fijadas o teñidas con Papanicolaou,
se obtienen mejores resultados con los
bloques celulares, ya que el procesamiento
es similar al de las biopsias, permiten aplicar
varios anticuerpos a las mismas células así
como utilizar controles.

APLICACIÓN DE LA
INMUNOCITOQUIMICA A
LA CITOLOGÍA.
O Las técnicas inmunocitoquímicas se
pueden realizar sobre cualquier material
citológico (PAAF, derrames, cepillados,
orinas, etc ), aplicando los mismos
paneles de anticuerpos que en las
biopsias. En las citologias ginecológicas
con sospecha de lesiones de alto grado,
preferentemente las que utilizan medio
líquido, se puede utilizar P16 ,CINTEC
Plus y ProEx C.

APLICACIÓN DE LA
CITOLOGÍA.
O Identificación del virus del papiloma
humano de alto riesgo utilizando la
prueba inmunohistoquímica Viroactiv-HPV
en pacientes con resultados citológicos de
células ASCUS en un laboratorio de
Patología Medellín-Colombia 2005-2006.

APLICACIÓN DE LA
INMUNOCITOQUIMICA A
LA CITOLOGÍA.
O Se realizó un estudio descriptivo
trasversal de cohorte, se tomaron 45
mujeres, pertenecientes principalmente a
los estratos socioeconómicos 2 (24
pacientes) 53,33% y 3 (14 pacientes)
31,11% sexualmente activas con
resultado de ASCUS en la citología, que
accedieron a participar en el estudio y que
respondieron las preguntas del formulario
propuesto.

APLICACIÓN DE LA
INMUNOCITOQUIMICA A
LA CITOLOGÍA.
De las 45 pacientes, un total de ocho (17,7%)
tuvieron alguna anormalidad en la colposcopia. De
estas ocho pacientes, tres (37,5%) no se habían
realizado una nueva citología de control y mantenían su
clasificación de ASCUS, mientras que cuatro (50%) tenían
una citología de control posterior a la colposcopia y
posterior al tratamiento normal. Una sola paciente (12,5%)
tenía en su citología un resultado igual al de la
colposcopia.

APLICACIÓN DE LA
INMUNOCITOQUIMICA A
LA CITOLOGÍA.
De estas 45 pacientes, solamente dos
(4,4%) resultaron positivas para VPH de
alto riesgo mediante la prueba Viroactiv
HPV

APLICACIÓN DE LA
PATOLOGIA MOLECULAR A
LA CITOLOGIA.
O Como sucede con la inmunocitoquímica
cualquier técnica de patología molecular se
puede aplicar al material citológico.
O CITOLOGIAS GINECOLOGICAS
La citología en medio líquido permite, tras
evidenciar morfológicamente la lesión, la
utilización de material para análisis ADN-VPH
Las técnicas más empleadas son:
- PCR
- Captura de Híbridos
- Hibridación in situ

PCR en citología.

ARTÍCULOS DE INVESTIGACIÓN

Estudio comparativo de detección del virus papiloma
humano (VPH) en muestras citológicas y biopsias de cuello
uterino

PCR en citología.
O Pacientes. Se incorporaron al estudio 44
pacientes del Policlínico de Patología
Cervical del Hospital Hernán Henríquez
Aravena de Temuco, entre junio y agosto
de 2002. Todas con antecedentes de
lesiones cervicales en citologías o
biopsias previas.
O Muestras. A cada paciente se les tomo
muestra: obtenida mediante cepillado
(CB).

PCR en citología.
O La muestra fue obtenida una vez
realizado el PAP, se colocó el cepillo en
un tubo de 15 ml que contenía 3 ml de
buffer TE pH 7.4 (10 mM Tris.Cl, 1 mM
EDTA pH 8). Este material fue procesado
de inmediato o mantenido a 4°C por un
máximo de 24 h, hasta realizar la
extracción del ADN.

PCR en citología.
O Detección y tipificación de VPH por PCR. Se
utilizó una PCR de consenso en nido para los
genes E6/ E7, usando para la primera
amplificación los iniciadores LCRs/E7as que
producen un segmento de 650 pares de
bases (pb). Para la segunda amplificación,
que genera fragmentos entre 230-270 pb, se
usaron los iniciadores PU1M-PU2R, que
permitieron subtipificar los tipos virales en AR
(HPV 16, 18, 31, 33, 35, 52) y PU2R-PU-31B
en los de BR (HPV 6, 11).

PCR en citología.
O En cada PCR se incluyeron 2 controles
positivos de VPH de AR y BR (plásmidos
VPH16 y VPH11), un control blanco y un
control negativo (ADN normal). Los productos
PCR se visualizaron mediante electroforesis
en geles de agarosa al 2% teñido con
bromuro de etidio.
O Condiciones de las PCR en nido ("nested").
30 ciclos (primera amplificación) y 40 ciclos
(segunda amplificación), con temperaturas de
hibridación de 40° a 55°C

PCR en citología.
O Detección VPH. PCR alto riesgo: 1-3.
Muestras citobrush. 4. Control BR (VPH
11). 5. Control AR (VPH 16). 6. Blanco.
PCR bajo riesgo: 1-3. Muestras citobrush.
4. Control BR (VPH 11). 5. Control AR
(VPH 16). 6. Blanco.

APLICACIÓN DE LA
PCR
LA CITOLOGIA.
Cualquier técnica de PCR puede realizarse
sobre material citológico, ya sea fresco, fijado
en alcohol o teñido con Papanicolaou. El uso
mas generalizado de esta técnica es en:
- PAAF de linfomas no Hodgkin
- PAAF de sarcomas
Material citológico de lesiones inflamatorias
para detección de agentes infecciosos y
secuencias virales.

APLICACIÓN DE LA
LA CITOLOGIA.
CITOLOGIAS NO GINECOLOGICAS
La aplicación de técnicas moleculares a las
citologías no ginecológicas no es tan
generalizada como sucede con el material
de biopsias, sin embargo su uso es cada
vez mayor, fundamentalmente en el material
de PAAF

APLICACIÓN DE LA
LA CITOLOGIA.
FISH o hibridación fluorescente in situ.
Se aplica fundamentalmente en:
- PAAF de tumores pediatricos
- PAAF de sarcomas
- PAAF de linfomas no Hodgkin
- PAAF de carcinomas mamarios ( HER2
Neu )
- Citologias de orina en carcinomas
uroteliales ( UroVision FISH TesT )
PAAF de carcinomas pulmonares ( EGFR )

Bibliografia.
O http://www.medicasuis.org/anteriores/volumen20.2/doc3.pdf
O http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-
98872005000600003
O Alonso de Ruiz P., Lazcano E., Hernández M.. "Cáncer
Cervicouterino. Diagnóstico Prevención y Control". Editorial
medica, Panamaricana.
O Alonso Patricia, Lazcano Eduardo, Hernandez Mauricio. (2005).
Cancer Cervicouterino Diagnostico, Prevención y Control. Mexico:
Editorial Medica Panamericana.
O Coll, C. (1992). Psicología y currículum. España: Editorial Paidós.
O Organización Panamericana de la Salud. (2002). Manual de
Procedimientos del Laboratorio de Citología. Washington, D. C.:
Organización Mundial de la Salud.
O Solomon Diane, Nayar Ritu. (2005). El Sistema Bethesda para
informar la citología cervical. Buenos Aires, Argentina: Ediciones
Journal Junín 873.
O Viguer Jose María, García Raimundo. (1995). Laboratorio y atlas
de citología. Madrid, España: McGRAW-HILL -INTERAMERICANA .

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