Hemocianinas, una herramienta inmunológica de la biomedicina actual

DEL CAMPO, MIGUEL; ARANCIBIA, SERGIO; NOVA, ESTEBAN; SALAZAR, FABIÁN; GONZÁLEZ, ANDREA; MOLTEDO, BRUNO; DE IOANNES, PABLO; FERREIRA, JORGE; MANUBENS, AUGUSTO; BECKER, MARÍA INÉS

doi:10.4067/S0034-98872011000200015

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versión impresa ISSN 0034-9887

Rev. méd. Chile vol.139 no.2 Santiago feb. 2011

http://dx.doi.org/10.4067/S0034-98872011000200015

Rev Med Chile 2011; 139: 236-246

ARTÍCULO DE REVISIÓN

Hemocianinas, una herramienta inmunológica de la biomedicina actual

Hemocyanins as immunostimulants

MIGUEL DEL CAMPO¹^,a, SERGIO ARANCIBIA¹^,a, ESTEBAN NOVA¹, FABIÁN SALAZAR¹, ANDREA GONZÁLEZ^1,a, BRUNO MOLTEDO^1,b, PABLO DE IOANNES^1,b, JORGE FERREIRA², AUGUSTO MANUBENS³, MARÍA INÉS BECKER^1,3

¹Fundación Ciencia y Tecnología para el Desarrollo, Santiago, Chile. ²Laborator¡o de Bioenergética, Programa de Farmacología Molecular y Clínica, Instituto de Ciencias Biomédicas (ICBM), Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Santiago, Chile. ³Departamento de Investigación y Desarrollo, Biosonda S.A. Santiago, Chile.
^aEstudiante, Programa de Doctorado en Bioquímica, Escuela de Graduados, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Universidad de Chile. Santiago, Chile.
^bEstudiante, Programa Doctorado en Ciencias Biomédicas, Escuela de Graduados, Mount Sinai School of Medicine, New York, USA.

Dirección para correspondencia

Hemocyanins, the giant oxygen transporter glycoproteins of diverse mollusks, are xenogenic to the mammalian immune system and they display a remarkable immuno-genicity. Therefore they are ideal non-specific immunostimulants to treat some types of cancer. They are used as an alternative therapy for superficial urinary bladder cancer (SBC), that has been traditionally treated with Bacillus Calmette-Guerin (BCG). In contrast to BCG, hemocyanins do not cause side-effects, making them ideal for long-term repetitive treatments. Hemocyanins have also been exploited as carriers to develop antibodies against hapten molecules and peptides, as carrier-adjuvants for cutting-edge vaccines against cancer, drug addiction, and infectious diseases and in the diagnosis of parasitic diseases, such as Schistosomiasis. The hemocyanin from Megathura crenulata, also known as keyhole limpet hemocyanin (KLH), has been used for over thirty years for the purposes described above. More recently, hemoc yanin from the Chilean mollusk Concholepas concholepas (CCH) has proved to be a reliable alternative to KLH, either as carrier protein, and as a likely alternative for the immunotherapy of SBC. Despite KLH and CCH differ significantly in their origin and structure, we have demonstrated that both hemocyanins stimulate the immune system of mammals in a similar way by inducing a potent Thl-polarized cellular and humoral response.

(Key words: Adjuvants, immunologic; Hemocyanin; Urinary bladder neoplasms.)

Las hemocianinas son glicoproteínas que transportan oxígeno en algunos moluscos y artrópodos, fijándolo mediante un grupo prostético que contiene cobre, cuyo estado oxidado les otorga su color azul¹. Al ser inoculadas en mamíferos, las hemocianinas de moluscos inducen una poderosa respuesta inmunológica, efecto atribuido a su origen filogenético lejano, enorme tamaño (4 a 8 MDa), residuos oligosacáridos y estructura cuaternaria con múltiples epítopos repetidos.

Las propiedades inmunoestimulantes de las hemocianinas las han convertido en herramientas de ingente uso en biomedicina². Se utilizan como proteínas transportadoras (carrier) para producir anticuerpos contra haptenos y péptidos, aplicación creciente en la formulación de vacunas experimentales contra patógenos y cánceres^3,4. Además, por sí solas se emplean como inmunoestimulantes no específicos en la terapia del carcinoma superficial de vejiga (CSV) como alternativa al Bacillus Calmette-Guerin (BCG)⁵ y en vacunas de células dendríticas⁶. La hemocianina de la lapa californiana (Megathura crenulata) conocida como KLH, por su nombre en inglés keyhole limpet ha sido utilizada por más de 30 años con tales propósitos. Su demanda creciente ha afectado su biodisponibilidad, llevando a la búsqueda de nuevas proteínas inmunoestimulantes.

Nuestro grupo descubrió que la hemocianina del molusco loco (Concholepas concholepas) denominada CCH, tiene propiedades inmunológicas comparables a KLH^7,8, siendo una buena alternativa como proteína transportadora⁹, en vacunas experimentales¹⁰ y en el tratamiento del CSV¹¹. Aun cuando CCH y KLH difieren en su origen y estructura, el hecho que ambas proteínas induzcan similares respuestas inmunoestimulantes, sugiere que poseen un patrón conservado que sería reconocido por el sistema inmune, estimulando un mecanismo inmunogénico ancestral presente en los mamíferos.

Estructura de las hemocianinas de moluscos

Por su enorme tamaño, la estructura de las hemocianinas ha sido estudiada por microscopia electrónica de transmisión (Figura 1). Si bien ambas proteínas presentan dos tipos de subunidades, en KLH constituyen homodecámeros que se asocian en pares formando homodidecámeros, cuya estabilidad depende del Ca+² y Mg+² en su medio de mantención¹². En cambio, en CCH, las subunidades están entremezcladas y se organizan como heterodecámeros que a su vez conforman heterodidecámeros, sin la necesidad de iones divalentes, lo cual le confiere mayor estabilidad comparativa frente a KLH^8,13 (Tabla 1). Sin embargo, KLH y CCH son igualmente inmunogénicas, propiedad que atribuimos a secuencias compartidas en su estructura primaria.

FIGURA 1 Organización general de las hemocianinas de moluscos gastrópodos. A. Microfotografía de hemocianina de C. concholepas con tinción negativa mostrando su forma de cilindro hueco (325A y 392A, diámetro externo y altura, respectivamente). Los círculos y rectángulos corresponden a vistas de la proteína desde arriba y laterales, respectivamente. Se señala un didecámero (flecha larga) y un decámero (flecha corta). B. Esquema de la estructura habitual de oligómero con forma de cilindro hueco de las hemocianinas de moluscos. En gastrópodos, como CCH y KLH, los decámeros Oque corresponden a la estructura básica, formada por la asociación no covalente de 10 subunidades- se asocian de a pares formando didecámeros. Cada subunidad a su vez, está constituida por 8 dominios globulares, unidos entre sí por un péptido espaciador constituido por 10 a 15 residuos de aminoácidos, de manera similar a un collar de perlas; cada uno de estos dominios posee un par de átomos de cobre a los cuales se une en forma reversible una molécula de oxígeno, razón por la cual se les denomina unidades funcionales. C. Esquema comparativo de la organización de los dos tipos de subunidades en KLH y CCH, mostrando que a nivel del decámero, KLH es homodecámerica, es decir, que el oligómero está compuesto por 10 subunidades iguales, y a nivel del didecámero, es homodidecamérica. En contraste, en CCH ambas estructuras tienen entremezcladas las dos subunidades (de una manera no dilucidada aún) constituyendo heterodecámeros y consecuentemente, heterodidecámeros.

Dadas las proyecciones terapéuticas de estas enormes proteínas, se han iniciado estudios sobre su síntesis¹⁴ y el clonamiento de sus genes³. En el futuro, se podría producir algún dominio recombinante, no sólo de interés inmunológico. Al respecto, se ha caracterizado un fragmento de la hemocianina de caracol marino (Rapana tho-masiana) (RtH) que presenta actividad antimicrobiana, propiciando su utilización como potencial antibiótico¹⁵, mientras que un fragmento de la hemocianina de camarón (Paneus vannamei) ha mostrado poseer actividad antifúngica¹⁶.

Mecanismos de inmunoestimulación

Desde la década de 1960-69, KLH se ha utilizado como antígeno modelo para estudiar las respuestas timo-dependientes mediadas por linfocitos T CD4+, caracterizadas por la presencia de IgM en la respuesta primaria e IgG en la secundaria, además de linfocitos de memoria. No obstante, se sabe poco sobre los mecanismos involucrados en su poderosa inmunogenicidad. Considerando que el inicio de una respuesta inmune requiere de señales de peligro o inflamación¹⁷, surge la interrogante de cuáles características estructurales de KLH y CCH per se cumplen esta función.

El efecto antitumoral de las hemocianinas en CSV requiere de una sensibilización previa con la proteína, para direccionar así la respuesta inmune hacia la secreción de citoquinas del tipo Th1 (IL2, IL12, INFy y TNFa) que activan la citotoxicidad mediada por células¹⁸. En este mecanismo, las células dendríticas juegan un rol clave, procesando el antígeno para presentarlo a linfocitos T CD4+ y, de esta forma, inducir dicha polarización de la respuesta¹⁹. Curiosamente, aunque se ha publicado que KLH induce la maduración de células dendríticas humanas cultivadas in vitro²⁰, estos resultados son controvertidos^21,22. Tampoco hay evidencia suficiente usando modelos murinos que permitan comprender cómo KLH y CCH inician la respuesta inmune y las células involucradas. Propusimos que los azúcares podrían participar²³. De hecho, algunos autores atribuyen las propiedades antitumorales de KLH a sus oligosacáridos². Por otra parte, si bien rasgos como el tamaño y la estructura cuaternaria han sido invocados para explicar la inmunogenicidad de estas proteínas, el hecho que las subunidades aisladas de CCH²³ y de RtH²⁴ también sean inmunogénicas per se, los descartan, sustentando que la adyuvancia intrínseca de las hemocianinas reside mayoritariamente en su xenogenicidad.

Se ha propuesto que la inmunogenicidad de las hemocianinas podría relacionarse con la existencia de linfocitos B de memoria, generados por una estimulación previa con xenoantígenos simila-res². Así, los anticuerpos preformados facilitarían su incorporación y procesamiento por células presentadoras de antígeno. Al respecto, células dendríticas derivadas de monocitos de pacientes con melanoma, previamente sometidos a terapia con una vacuna de células dendríticas que contenía KLH, fueron capaces de inducir la proliferación in vitro de linfocitos T KLH específicos, encontrándose que la internalización in vitro de KLH por las células dendríticas dependía de la presencia del suero de los pacientes en el medio de cultivo. Al bloquear los receptores FcgRII, se inhibió la internalización y presentación de KLH, concluyéndose que esta proteína ingresa en células dendríticas vía receptores FcgRII que unen el fragmento Fc de los anticuerpos anti-KLH, los cuales jugarían un rol en el inicio de la respuesta inmunoestimulante por KLH²⁵. Consecuentemente, si bien la hemocianina no estaría activando a células dendríticas de manera innata, no se puede descartar que otras células presentadoras de antígeno participen en dicha función.

Aplicaciones biomédicas

Las hemocianinas son usadas como transportadoras ("carrier") para producir anticuerpos y como carrier'-adyuvante en vacunas experimentales terapéuticas para cáncer. Entre sus ventajas, además de su costo razonable y la ausencia de efectos secundarios, está que direccionan la respuesta inmune hacia respuestas tipo Thl a diferencia de otros adyuvantes, como por ejemplo la alumina que lo hace hacia respuestas tipo Th2²⁶.

Proteínas carrier para producir anticuerpos contra péptidos y haptenos

Las hemocianinas se han utilizado en la producción de un sinfín de anticuerpos contra pequeñas moléculas de interés diagnóstico, incluyendo hormonas, drogas, antibióticos, y toxinas, que son acopladas químicamente. Así, animales inmunizados producen anticuerpos contra la hemocianina y contra la sustancia transportada, los cuales posteriormente se purifican y aplican en diversos ensayos basados en las reacciones antígeno anticuerpo²⁷.

Vacunas para patógenos

Péptidos inmunogénicos de patógenos acoplados a KLH han sido probados en el desarrollo de vacunas contra hongos, como Cryptococcus neoformans, causante de meningitis en enfermos con VIH²⁸, contra bacterias como Pseudomonas aeruginosa²⁹ y contra virus como virus papiloma³⁰, influenza³¹ y VIH, en este último caso, enfocadas a desarrollar anticuerpos neutralizantes contra péptidos conservados entre distintas cepas³², o para prevenir la transmisión del virus a través del calostro materno³³. Cabe señalar que la inmunoes-timulación crónica generada por KLH acelera la progresión del VIH³⁴, descartándola como terapia, no así como vacuna preventiva.

Vacunas antitumorales

Las vacunas antitumorales han surgido como una alternativa a las terapias antiproliferativas de quimio o radioterapia, solas o combinadas con ellas, y se caracterizan por potenciar la inmunidad frente al tumor, es decir, están diseñadas con fines terapéuticos a diferencia de las vacunas profilácticas. Se centran en la búsqueda de epítopos específicos en las células tumorales, generando anticuerpos contra ellos y así activar, a su vez, el complemento o una respuesta citotóxica mediada por inmunoglobulinas (Ig), evitándose así la formación de micrometástasis. Estos epítopos se conocen como antígenos asociados a tumores³⁵, los cuales generalmente son ramificaciones aberrantes de polisacáridos localizados en la superficie celular, tales como los glicolípidos Globo H y Lewis Y, GM2, GD2, GD3 y fucosyl-GMl; y las glicoproteínas MUC-1, Tn, sialyl Tn y TF³⁶. El objetivo de estas vacunas es transformar los antígenos tumo-rales en inmunógenos lo suficientemente potentes como para lograr desencadenar una respuesta inmune contra ellos. Aquí, las hemocianinas juegan un papel fundamental, utilizándose como proteínas carrier de dichos antígenos⁴. En el caso de los linfomas no Hodgkin, se usan las regiones variables de las inmunoglobulinas presentes en los clones oncogénicos de linfocitos B, vacunas conocidas como antiidiotipicas, que son dirigidas al paciente³⁷.

Las hemocianinas, además, se utilizan como agentes inmunomoduladores en las vacunas de células dendríticas, en las cuales, células presentadoras autólogas "se cargan" con el antígeno tumoral en presencia de KLH, ya sea con un lisado tumoral, antígeno recombinante o transfectando dichas células con ARN tumoral³⁸. En estos casos, la respuesta del paciente se mide mediante una reacción de hipersensibilidad retardada (DTH) contra KLH o el extracto tumoral³⁹. De manera análoga, se han obtenido resultados promisorios con CCH en pacientes con cáncer de próstata (Reyes D et al. Phase I/II Trial with dendritic cells loaded with an allogeneic prostate cancer lysate in hormone-refractory prostate cancer patients: preliminary results. 9th LatinAmerican Congress of Immunology, 2009).

A continuación se revisan algunos ensayos clínicos de vacunas que llevan hemocianina, aprobadas por los Institutos Nacionales de Salud de los Estados Unidos (NIH, USA) (Tabla 2 ).

Melanomas, sarcomas y neuroblastomas. Las vacunas están conformadas por los gangliósidos GM2, GD2 y GD3 conjugados con KLH y llevan el adyuvante natural saponina, proveniente de Quillaja saponaria Molina, denominado QS21⁴⁰. Estas vacunas generan altos títulos de IgM e IgG en pacientes con melanoma, en comparación a vacunas que usan GM2 y como adyuvante BCG.

51 bien en un comienzo se postuló que la inmunoterapia contra GM2 era efectiva en reducir el riesgo de recaídas en pacientes post operados con melanoma en etapa III (basado en un estudio con 52 pacientes, en que el 88% desarrolló anticuerpos IgM anti-GM2 y el 71% IgG)⁴¹ posteriormente, un estudio clínico Fase III en 1.314 pacientes con melanoma en estado II, concluyó que dicha vacuna era ineficiente⁴². Citamos este caso porque estudios clínicos tempranos exitosos no siempre se corroboran en estudios clínicos posteriores que involucran un mayor número de pacientes.

Los gangliósidos GD2-Lactona y GD3-Lactona, se usan también como blancos terapéuticos, porque generan en los pacientes títulos de IgM e IgG mayores que para GM2. Basados en estos resultados, se encuentra en desarrollo un estudio Fase II de una vacuna bivalente que contiene ambos antígenos conjugados a KLH, ya sea con QS-DG una saponina sintética o un carbohidrato denominado OPT-821 como adyuvantes⁴³.

Respecto a las vacunas con células dendríticas, el primer estudio clínico reportado incluyó 16 pacientes con melanoma avanzado que fueron tratados con dendríticas cargadas con un lisado tumoral o una mezcla de péptidos de melanoma en presencia de KLH, factor estimulante de colonias de monocitos y granulocitos (GM-CSF) e IL4 como inmunomoduladores. Los pacientes toleraron la vacuna y no desarrollaron autoinmunidad: 11 mostraron respuesta DTH positiva contra los péptidos y 5 mostraron regresión de las metástasis⁴⁴. Actualmente, otros antígenos como MART-1/MelanA, Tirosinasa, MAGE-3 y gp100 han sido cargados en células dendríticas CD34⁺y evaluados en un ensayo clínico Fase I. Sus promisorios resultados han justificado el diseño de estudios Fase II y III⁴⁵. En Chile, utilizando KLH y un lisado tumoral denominado TRIMEL, se han obtenido resultados prometedores ya que más de 60% de los pacientes DTH positivos muestran un aumento de la mediana de sobrevida de 33 meses, frente a 11 meses en los DTH negativos⁴⁶.

Cáncer de próstata: Numerosos antígenos tumorales acoplados a KLH han sido probados en vacunas monovalentes, bivalentes o polivalentes⁴⁷. Para el antígeno Thomsen-Friedenreich (TF), se realizó un ensayo clínico en 20 pacientes con cáncer prostático controlado quirúrgica o radiológicamente, que fueron vacunados 5 veces con distintas dosis. El título más alto de IgM se logró con la dosis más baja, de 1 mg de TF-KLH en la séptima semana⁴⁸. Con los antígenos MUC-2-KLH y Globo H-KLH se han obtenido resultados similares. En ambos casos, las vacunas contenían QS-21 o GPI-0100 como adyuvante y no hubo diferencias⁴⁹. Otro ensayo clínico Fase II con 30 pacientes, utilizó la vacuna hexavalente llevando los antígenos Globo H, GM2, Lewis Y, MUC1-32 mer, TF(c) y Tn(c), conjugados a KLH y llevando QS21; sus resultados plantearon la controversia de cuál estrategia es mejor, si vacunas mono o polivalentes, ya que si bien con las primeras se alcanzaron títulos más altos de anticuerpos, las polivalentes abarcan un mayor número de antígenos⁵⁰.

Cáncer de mama, ovario, trompas de Falopio y peritoneal: Sialyl-Tn es uno de los antígenos tumorales que se presenta más frecuentemente en los adenocarcinomas de mama, ovario, colon rectal, estómago y páncreas. Este antígeno, conjugado con KLH, se ha denominado Theratope⁵¹. El uso previo de ciclofosfamida antes de aplicar Theratope mejora tanto los títulos de anticuerpos anti-STn, como la sobrevida de los pacientes: 26,5 meses versus 9,2 meses de los pacientes control⁵². En otra aplicación, 27 pacientes con cáncer de mama de alto riesgo, fueron tratados con STn-KLH y QS21, lográndose en todos títulos de IgM e IgG significativos contra STn⁵³. Esta terapia está en evaluación desde 1999, en un ensayo clínico Fase III con 900 pacientes con cáncer de mama, desconociéndose sus resultados a la fecha.

También se han utilizado vacunas polivalentes formuladas con los antígenos GM2, Globo-H, Lewis Y, Tn(c), STn(c), TF(c), y Tn-MUC1, conjugados individualmente con KLH y adicionando QS21 o OPT-821⁴². Pruebas clínicas en 11 pacientes con cáncer de ovario, de trompa de Falopio o cáncer peritoneal, recibieron la vacuna heptavalente en 5 dosis cada 2 semanas, siendo bien tolerada, sin indicios de inducir autoinmunidad y con una respuesta de anticuerpos variable: los siete antígenos generaron IgM en al menos un paciente, en cambio IgG solo se obtuvo para Tn-MUC-1. Además, 8 pacientes mostraron títulos contra 3 de los antígenos presentes en la vacuna. Alternativamente, se han sintetizado estos antíge-nos y se han acoplado en una molécula de KLH, lográndose mejores títulos en relación a las vacunas con antígenos acoplados individualmente⁴⁷, resultados que han derivado en diversos ensayos clínicos en desarrollo.

Cáncer de pulmón: En la erradicación de las micrometástasis quimio-resistentes del cáncer pulmonar de células pequeñas (SCLC), se utiliza como blanco terapéutico el gangliósido fucosyl-GM1. En un estudio clínico de 11 pacientes con SCLC inyectados con este antígeno sintético acoplado a KLH, 8 de ellos mostraron títulos IgM (1:80) contra fucosyl-GM1 y sólo un paciente desarrolló IgG con un título similar, resultados que llevaron a un estudio Fase II⁵⁵.

Linfomas y mielomas: La estrategia de usar como antígenos tumorales la región variable de la Ig en los linfomas no Hodgkin surgió en la década de 1970, pero sólo se lograron óptimas inmunizaciones con los idiotipos (ID) en la década siguiente, al ser conjugados con KLH⁵⁶. Su efecto se potenció al incorporar GM-CSF, porque facilita la inducción de células T CD8+, presumiblemente reclutando células dendríticas en la zona de vacunación⁵⁷. El primer estudio clínico Fase I se realizó en pacientes con linfoma folicular tratados con quimioterapia, que fueron inmunizados con la inmunoglobulina autóloga del tumor conjugada con KLH: 41% generó anticuerpos anti-ID y 17% mostró respuesta proliferativa celular⁵⁸. Luego, en estudios clínicos Fase II, utilizando GM-CSF en pacientes tratados con un régimen de quimioterapia uniforme, mostraron 75% de respuesta de anticuerpos y 95% de activación de células CD4+ y CD8+ ⁵⁹. Estos alentadores resultados permitieron iniciar ensayos clínicos Fase III para establecer, definitivamente, los beneficios clínicos inducidos por las vacunas antiidiotípicas³⁷.

Vacunas contra drogas de abuso

Se encuentran en desarrollo vacunas para frenar la reincidencia de los adictos a drogas de abuso. Consisten en generar anticuerpos que disminuyan la concentración libre sanguínea de la droga y su efecto a nivel del sistema nervioso central, al impedir que traspasen la barrera hematoencefálica. Los estudios preclínicos usando KLH como carrier de estas drogas son auspiciosos⁶⁰, no obstante, la única evidencia clínica con este propósito utilizó como carrier de cocaína la subunidad-B de la toxina colérica, con buenos resultados⁶¹.

Inmunoestimulante no específico en la terapia del carcinoma superficial de vejiga

Los inmunoestimulantes no específicos pueden modular la respuesta inmune actuando como eficaces agentes antitumorales. Es el caso de la terapia del CSV mediante instilación de BCG por la uretra, luego de eliminar quirúrgicamente el tumor, un tratamiento eficiente pero con efectos secundarios adversos⁶². Olsson et al⁶³, evaluando el estado inmunológico de pacientes con CSV, encontraron una disminución significativa en la recurrencia del tumor en los sujetos que recibieron subcutáneamente KLH, abriendo la puerta para usarla, por sí sola, como inmunoestimulante no específico para tratar dicho cáncer. Jurincic et at⁶⁴, compararon KLH con mitomicina C en 44 pacientes y encontraron que KLH fue más eficiente en prevenir la recurrencia del tumor. Posteriormente, Flamm et al⁶⁵ comunicaron que la terapia con KLH no mostraba diferencias frente a la terapia con etoglúcidos. Por otro lado, Wishahi et al⁶⁶confirmaron la efectividad de KLH en pacientes diagnosticados con CSV asociado a esquistoso-miasis. Este conjunto de resultados sustentaron que la inmunoterapia con KLH es eficaz para esta patología y sin efectos secundarios adversos³. Recientemente se demostró por primera vez que una hemocianina diferente como es CCH, tiene similares efectos que KLH: ratones previamente sensibilizados con CCH y desafiados con células tumorales de vejiga muestran una poderosa respuesta de tipo Thl, esto es, se activan las células asesinas naturales (Natural Killer) con un concomitante aumento del IFNy circulante¹¹.

Otros usos biomédicos

Las hemocianinas se han utilizado como trazadores inmunológicos en test de inmunocompetencia⁶⁷, desarrollándose protocolos especiales para diferentes situaciones clínicas tales como depresión psicológica⁶⁸, DTH en pacientes quirúrgicos⁶⁹, en respuestas post trauma cardíaco en adultos mayores⁷⁰ o para evaluar respuesta en pacientes con inmunodeficiencia común variable⁷¹-

En diagnóstico, debido a la similitud entre oligosacáridos del Schistosoma mansoni y los presentes en KLH, los anticuerpos del suero de pacientes infectados muestran reacción cruzada con KLH, lo cual se utiliza para diagnosticarlos mediante un ensayo inmunoenzimático (ELISA) que usa KLH y que discrimina entre infecciones agudas o crónicas⁷².

Conclusiones y perspectivas futuras

Conociendo el mecanismo de inmunoestimulación de las hemocianinas, podríamos dirigirlo hacia inmunoterapias más efectivas. Si consideramos la biodiversidad de moluscos que habitan nuestras costas y su potencial en cuanto al poder inmunogénico que sus hemocianinas contienen, auguramos que el desarrollo de la inmunofarmacología en base a estas proteínas es inconmensurable. Al respecto, por ejemplo, hemos descubierto que la hemocianina de la lapa negra (Fissurella latimarginata FLH) es significativamente más inmunogénica que KLH y CCH⁷³observación que nos tiene investigando cuáles son las características estructurales que le confieren esta propiedad y evaluando el potencial uso de esta nueva hemocianina en vacunas antitumorales.

Agradecimientos: Al Profesor Alfredo E. De Ioannes (Pontificia Universidad Católica de Chile y Biosonda S.A.) por el descubrimiento y contribución al conocimiento de la hemocianina de C. concholepas. A los Médicos Rodrigo Andrés Leal Becker y Manuel Nájera De Ferari por la revisión crítica del manuscrito. A Gabriel De Ioannes por el diseño del esquema sobre la estructura de las hemocianinas de moluscos.

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Recibido el 7 de junio de 2010, aceptado el 7 de noviembre de 2010.

Trabajo financiado por Proyectos FONDECYT y Fundación COPEC-UC a M. I. Becker, M. Del Campo, S. Arancibia y A. González son becados CONICYT

Correspondencia a: María Inés Becker, Ph.D. Fundación Ciencia y Tecnología para el Desarrollo. Avenida Alcalde Eduardo Castillo Velasco 2902, Santiago, Chile. Tel: (56-2) 209-6770. E-mail: mariaines.becker@fucited.cl