Objetivo
Detectar la presencia de anticuerpos anti-brucella en suero mediante la prueba rosa de bengala o prueba del antígeno tamponado de Brucella.
Fundamento
La brucelosis, también llamada fiebre de malta, es una enfermedad zoótica infecciosa de distribución mundial producida por bacterias del genero Brucella, que ataca a varias especies de mamíferos, dentro de los cuales se encuentra el ser humano, en el cual produce un cuadro febril inesperado.
La prueba rosa de bengala o prueba del antígeno tamponado de Brucella, es una técnica rápida de aglutinación en porta para la detección de anticuerpos anti-brucella en sueros animales y humanos. La suspensión bacteriana es reactiva tanto con anticuerpos IgG, como IgM, siendo los primeros detectados más precozmente (infecciones sub-clínicas) y por un periodo más largo de tiempo (fase crónica)
La determinación se efectúa ensayando la suspensión tamponada (Ph 3,6). La Brucella coloreada con rosa bengala frente a los sueros problema. La presencia o ausencia de aglutinación visible es indicativa de la presencia o ausencia de anticuerpos en las muestras ensayadas.
Materiales
- Muestra: suero congelado
- Portaobjetos o tarjeta para pruebas de aglutinación
- Reactivos:
- Reactivo rosa de bengala: suspensión de bacterias Brucella abortus tamponada a Ph 3,6 y coloreada con rosa de bengala.
- Control +: suero animal anti-brucella con una actividad aglutinante superior a 100 UI/Ml.
- Control -: suero animal con una actividad aglutinante inferior a 10 UI/Ml.
- Palillos
- Micropipetas y puntas
Procedimiento
1º- Depositar una gota (50 µL) de suero problema en una de los círculos del porta. En círculos adicionales, depositar una gota de control positivo y una gota de control negativo.
2º- Añadir a cada circulo una gota de reactivo rosa de bengala próxima a la muestra a analizar.
3º- Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable, extendiéndola de forma que cubra por completo la superficie de cada anillo. Utilizar palillos distintos para cada mezcla.
4º- Mover la tarjeta con agitador rotatorio o manualmente durante 4 minutos.
5º- Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la aparición de cualquier signo de aglutinación.
Resultados
Al poner las muestras de suero y añadirle el reactivo rosa de bengala, no se a producido ninguna aglutinación, al igual que en el control negativo. Sin embargo, en el control positivo si se ha producido la aglutinación.
Fuente: fotos tomadas por mi en el laboratorio de analisis clinico del IES albaida
Interpretación
Al producirse la aglutinación en el control positivo, sabemos que la prueba funciona correctamente, por lo que al no producirse aglutinación en la muestra problema de suero, podemos determinar que no hay presencia de anticuerpos de brucella.
PRECAUCIONES
- Etiquetar correctamente todo lo utilizado durante la practica.
- No contaminar muestras y reactivos.
- Leer bien las indicaciones de los reactivos y productos utilizados.
- Desechar correctamente los residuos.
- Atemperar los reactivos y las muestras utilizados.
INFOGRAFÍA Y WEBGRAFÍA
IMÁGENES: las imágenes aportadas a en este PNT para su realización son realizadas por mi en el laboratorio del instituto I.E.S. Albaida.
INFORMACIÓN:
- Protocolo obtenido del profesorado del instituto I.E.S. Albaida
- Wikipedia: https://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Portada
- Blog de laboratorio clínico: http://laboratorioareaclinica.blogspot.com/search/label/Tinciones%20bacteriol%C3%B3gicas
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