Desnaturalización y Renaturalización de la cadena de ADN

DESNATURALIZACIÓN DE LA
CADENA DE ADN
Altas temperaturas produce
una separación de la doble
hélice
Ocurre porque
los enlaces o puentes de
hidrogeno se rompen
Esto puede ocurrir
durante la reacción en
cadena de la polimerasa
PCR: Consiste en la
amplificación in
vitro de un
fragmento de ADN
específico

Cuando se calienta un DNA
de doble hebra se rompen
las fuerzas de unión entre
las dos hebras y acaban
por separarse
Por tanto, el DNA
desnaturalizado es de una sola
hebra.
DESNATURALIZACIÓN DE LA CADENA DE ADN

Desnaturalización del ADN. Una doble hebra de ADN se calienta,
y los pares de bases comienzan a separarse de forma
cooperativa. Al final, las dos hebras están totalmente separadas.

Factores que interviene en la
Desnaturalización de la cadena de ADN
• La forma más corriente de
desnaturalizar el DNA es por
calentamiento
Calentamiento
• El pH elevado porque cambia la carga de
algunos grupos que forman parte de los
puentes de hidrógeno
pH
• Se produce la separación de las hebrasAgua Destilada

Relación de la desnaturalización del
ADN con la temperatura °C

Relación entre la temperatura
°C y la inclusión del ADN en
etanol y agua normal.
Los reactivos
que incrementan
la solubilidad de
las bases (como
el
etanol) disminuy
en la Tm, ya que
reducen la
interacción
hidrofóbica que
las mantiene
unidas.
De esto se
deduce que
tanto los puentes
de
hidrógeno como
las interacciones
hidrofóbicas coo
peran para
formar una
estructura
estable
Si se reduce o
elimina
cualquiera de
estas
interacciones,
la estabilidad
disminuye y la
Tm es menor

RENATURALIZACIÓN DEL DNA
Una vez que el ADN ha sido desnaturalizado se hace descender
lentamente la temperatura hasta casi 25 oC por debajo de Tm, las
dos cadenas vuelven a unirse por completo

Para que tenga lugar la
renaturalización deben cumplirse
dos requisitos
La concentración salina debe ser
alta ([NaCl] entre 0,15 y 0,5 M) para
eliminar la repulsión entre los
grupos fosfato de las dos hebras
La temperatura deber ser lo
suficientemente elevada como para
romper los puentes de hidrógeno

HIBRIDACIÓN DEL DNA
Cuando el DNA renaturalizado se forma a partir de
moléculas de DNA de distinto origen la renaturalización
se conoce como hibridación
Una característica importante de la hibridación es
que no sólo se puede producir entre dos DNA
distintos, sino también entre DNA y RNA
Siempre que sus secuencias de nucleótido sean
complementarias.

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