Tinciones ácido-resistentes para mycobacterias y actinomicetos
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Este documento describe diferentes tincciones ácido-resistentes utilizadas para identificar bacterias y protozoos. Explica los protocolos de las tincciones de Ziehl-Neelsen, Kinyoun y Auramina-Rodamina, incluyendo los reactivos, procedimientos y organismos que identifican. También resume las principales diferencias entre estas tincciones en términos de mordientes, decolorantes, contraste, necesidad de calor y facilidad de identificación de organismos.
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- 2. TINCIONES ÁCIDO-RESISTENTES MYCOBACTERIAS Se utiliza en BACTERIAS GRAM POSITIVAS BACILOS Presentan SUSTANCIAS CEROSAS EN LA SUPERFICIE DE SU PARED CELULAR ACIDO MICOLICO (Factor Cordón). Sustancia hidrofobica cerosa e impermeable, compuesto por un grupo de lípidos hidroxilicos de cadena ramificada. ALGUNOS Actinomicetos Nocardia Corynebacterium Protozoos (Apicomplexos)
- 3. PRINCIPALES MYCOBACTERIIAS Y ACTINOMICETOS QUE UTILIZAN LA TINCIÓN ACIDO-RESISTENTE MYCOBACTERIAS Aerobios No esporuladores Sin capsula ÁCIDO MICÓLICO (Factor Cordón) 1. M. Tuberculosis (Tuberculosis Pulmonar) 2. M. Leprae (Lepra) 3. M. Bovis (Similar a la tuberculosis), 4. M. Kansasi (enfermedades pulmonares en bovinos) 5. M. Africanum, M. Genavense, M. Haemoplhium, M. Simiae (Presente en pacientes con SIDA) 6. M. Ulcerans (Ulceras y Nódulos subcutáneos) 7. M. Xenopi (Similar a la tuberculosis). ACTINOMICETOS • • • • • Anaerobios Estrictos Forman Cadenas o Filamentos (1um de ancho) La mayoría esporuladores Saprófitos 3 infecciones: Actinomicosis, nocardiosis y actinomicetoma 1. A. Israelí (infecciones confundidas con cáncer), 2. A. Naeslundi 3. A. Odontolycitus 4. A. Viscosus 5. A. Meyeri
- 4. FUNDAMENTO 6.6 - Dimicolitrehalosa 2 di alcoholes idénticos de cadena larga FUCSINA
- 5. REACTIVOS NECESARIOS CARBOL FUCSINA Fucsina básica............................................. 0.3 g Etanol 95°C.............................................….10.0 ml Cristales de fenol fundidos por calor....... 5. 0ml Agua destilada.......................................... 95.0ml Disuelva la fucsina básica en el alcohol y el fenol en el agua. Mezcle las dos soluciones y deje en reposo por una semana antes de usar. Almacene en frascos ámbar a temperatura ambiente. ALCOHOL- ÁCIDO: Etanol 95°C.................................................97.0ml Ácido clorhídrico concentrado................ 3.0ml Agregue el HCL al alcohol, homogenice y almacene en frascos a temperatura ambiente. AZUL DE METILENO Azul de metileno...................................... 0.3 g Agua destilada....................................... 100.0ml Disuelva el azul de metileno en el agua mediante agitación. Almacene en frascos ámbar a temperatura ambiente. SOLUCIÓN DE FUCSINA FENICADA Preparación utilizada en el tratamiento de infecciones micóticas superficiales. Contiene ácido bórico, fenol, resorcinol, fucsina, acetona y alcohol en una solución acuosa.
- 6. TINCIÓN DE ZIEHL - NEELSEN PROTOCOLO MATERIALES. * ALCOHOL ACIDO (Etanol 95%, HCl 3%) * FUSCINA FENICADA( Solución con Fenol y mayor concentración de Fucsina) o CARBOLFUCSINA (Colorante primario y un primer mordiente) * PORTAY CUBRE OBJETOS * AZUL DE METILENO (Contraste) * MECHERO BUNSEN * MICROSCOPIO * AGUA DESTILADA
- 7. PROCEDIMIENTO Ehrlich (1882) usaba ACEITE DE ANILINA con VIOLETA DE METILO Franz Zeihl (1882) reemplaza ACEITE DE ANILINA por FENOL Friedrich Neelsen (1883) reemplaza VIOLETA DE METILO por la FUCSINA BÁSICA SE HACE EL FROTIS LAVAR SECAR Y OBSERVAR AL MIROSCOPIO CON ACEITE DE INMERCION SE FIJA A UNA LLAMA COLORACION DE CONTRASTE CON AZUL DE METILENO O ACIDO PIRICO (1 minuto) SE COLOREA CON FUCSINA FENICADA (3-5 minutos) DECOLORAR CONALCHOL ACIDOQUITANDO EL COLORANTE (7 minutos) CALIENTA EN LA LLAMA DEJAENFRIAR Y LAVAR CON AGUA DESTILADA
- 8. Mycobacterium leprae Mycobacter phlei Y Staphilococccus aereus Cyclospora cayetanensis Mycobacterium tuberculosis
- 9. Nocardia
- 10. TINCIÓN DE KINYOUN PROTOCOLO MATERIALES FUSCINA FENICADA( Solución con Fenol y mayor concentración de Fucsina) ACIDO SULFÚRICO (H2SO4) al 3%(reemplazando al alcohol ácido) PORTAY CUBRE OBJETOS AZUL DE METILENO (Contraste) MICROSCOPIO AGUA DESTILADA
- 11. PROCEDIMIENTO Se conoce también como la tinción de Zeihl- Neelsen modificada Requiere menos tiempo que la anterior Diferencia el genero Nocardia con el Mycobacterium SE HACE EL FROTIS OBSERVAR AL MIROSCOPIO CON ACEITE DE INMERCION SE COLOREA CON FUCSINA FENICADA (5 minutos) COLORACION DE CONTRASTE CON AZUL DE METILENO O ACIDO PIRICO (3 minutos) DECOLORAR CON UN ACIDO DEBIL QUITANDO EL COLORANTE (3 minutos) LAVAR CON AGUA DESTILADA
- 12. Nocardia Oocistos de Cryptosporidium parvum Mycobacter chelonei Mycobacter tuberculosis
- 13. TINCIÓN DE AURAMINA - RODAMINA PROTOCOLO MATERIALES FLUOROCROMOS: - AURAMINA (11,1 g 10,5 g) - RODAMINA B (5,25 g, 5,6 g) PORTA Y CUBRE OBJETOS MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA PERMANGANAO DE POTASIO (CONTRASTE) GLICEROL (525,0 ml o 556,0 ml) FENOL (70,0 ml o 74 ml) AGUA DESTILADA (350,0 ml o 370 ml)
- 14. PROCEDIMIENTO Es simplemente una herramienta de detección Diferencia el genero Nocardia con el Mycobacterium, incluyendo a todos los esporozoarios parásitos. SE HACE EL FROTIS MUESTRA REUSABLE SE COLOREA CON EL FLUOROCROMO SE OBSERVA AL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA O DE CAMPO OSCURO COLORACION DE CONTRASTE CON PERMANGANATO DE POTASIO LAVAR CON AGUA DESTILADA
- 15. Mycobacter avium Cyclospora cayetanensis Oocistos de Cryptosporidium parvum
- 18. PRINCIPALES DIFERENCIAS DE LAS TINCIONES ACIDORRESISTENTES ZEHIL-NEELSEN KINYOUN RODAMINA AURAMINA 1° MORDIENTE FUCSINA FENICADA FUCSINA FENICADA NO 2° MORDIENTE FISICO (MECHERO) NO NO DECOLORANTE ALCOHOL ÁCIDO ÁCIDO DEBIL NO CONTRASTE AZUL DE METILENO AZUL DE METILENO PERMANGANATO DE POTASIO CALOR SI NO NO DIFICULTAD ALTA MEDIA MEDIA MICROSCOPIO ÓPTICO O DE CAMPO CLARO ÓPTICO O DE CAMPO CLARO DE FLUORESCENCIA O DE CAMPO OSCURO TIEMPO Aprox. 20 min Aprox. 15 min Aprox. 10 min ORGANISMOS (Facilidad) MYCBACTERIAS Y ACTINOMICETOS ACTINOMICETOS PROTOZOARIOS COLOR FINAL DE LA MUESTRA BAAR: VIOLETA VIOLETA AMARILLO O ANARANJADO OTROS: AZUL AZUL NEGRO
- 19. REFERENCIAS • NEGRONI M. (2009), Microbiología Estomatológica. Fundamentos y Guía práctica, 2da Ed., Editorial Médico Panamericana S.A., Buenos Aires. p. 547 – 548 • BROOKS G.F., BUTEL J.S., MORSE S.A.(2005), Microbiología Médica de Jawertz, Melnick y Adelberg, 18ava Ed., El Manual Moderno, México. p. 38-39, 312 – 323 • LANSING M. P., JOHN P. H., DONALD A. K. (2004), Microbiología, 5ta Ed., McGRAW-HILL-Interamericana De España, España. p. 28 – 31 • AGURTO SAENZ T. (1983), Colorantes y Coloraciones, LOS ANDES, Lima. p. 29 • AMÁBILE CUEVAS C. F. (2008), Diccionario de InfectologÍa y Microbiología Clínica, Fundación LUSARA para investigación científica, México. p. 8 – 10, 79 - 80, 134 – 135 • MADIGAN M.T. , MARTINKO J.M., PARKER J., Biología de los Microorganismos, Pearson, Madrid. p. 352,412
- 20. GRACIAS