Tincion Rodamina

TINCIÓN:
Técnica auxiliar en microscopía para mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio.

También se denomina coloración, ya que implica agregar un colorante específico a un sustrato
para cualificar o cuantificar la presencia de un determinado compuesto.
MICROORGANISMOS Y TINCIÓN ACIDORRESISTENTE

La "Ácido-resistencia" se refiere a una propiedad física específica de ciertas
bacterias, es decir, su capacidad de resistir la decoloración del ácido durante los
procedimientos de tinción. Estos organismos resistentes se denominan
"microorganismos ácido-resistentes", y sólo pueden ser coloreados para fines de
visualización utilizando tinción acidorresistente.
Hay tres tinciones principales que se utilizan con éxito con los organismos
acidorresistentes:
RODAMINA-AURAMINA
Los ácidos micólicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen

afinidad para los fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se
fijan a las bacterias, que aparecen de color amarillo o naranja brillante
contra un fondo verdoso. El permanganato de potasio, empleado como
contraste, evita la fluorescencia inespecífica. Todos los microorganismos
ácido-alcohol resistentes, incluyendo los esporozoarios parásitos, se tiñen
con estos colorantes.
Un aspecto importante de la coloración rodamina-auramiria es que luego

los frotis pueden ser reteñidos con la coloración de Ziehl-Neelsen o
Kinyoun directamente sobre la tinción con el fluorocromo, si se elimina
antes el aceite de inmersión. De esta forma, los resultados positivos
pueden ser confirmados con las coloraciones tradicionales, que además
permiten la diferenciación morfológica.
NARANJA DE ACRIDINA
El fluorocromo naranja de acridina se une al ácido nucleico ya sea en su

forma nativa o desnaturalizada. En algunas preparaciones de naranja de
acridina, el color de la fluorescencia puede variar, dependiendo del pH y
de la concentración. El naranja de acridina ha sido empleado como
colorante vital, que da una fluorescencia verde si el microorganismo está
vivo y roja si está muerto. De todos modos, como el colorante se intercala
en el ácido nucleico, el germen viable se inactivará poco tiempo después
de la tinción.
El uso de naranja de acridina para detectar la presencia de bacterias en
los hemocultivos ha sido ampliamente aceptado. De hecho, una gran
cantidad de estudios han demostrado que la tinción de hemocultivos con
naranja de acridina es tan sensible como el subcultivo ciego para la
detección inicial de hemocultivos positivos.
ZIEHL-NEELSEN (BAAR)
Las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos

grasos (ácidos micólicos) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono)
que les confieren la propiedad de resistir la decoloracíón con alcohol-
ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se
denominan ácido-alcohol resistentes. Las micobacterias como M.
tuberculosis y M. marinum y los parásitos coccídeos
como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-
alcohol resistencia. La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere
calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que
contiene ceras.
Se ha desarrollado una coloración de ácido-alcohol resistencia modificada

que diferencia las especies de Nocardia (bacterias ramificadas
filamentosas cuyas paredes celulares contienen ácidos-grasos de unos 50
átomos de carbono), de los actinomiceos (muy semejantes pero no ácido-
alcohol resistentes). Nocardia spp son decoloradas por la mezcla ácido-
alcohol estándar pero no por un tratamiento más suave con ácido sulfúrico
0,5 a 1%. Estos microorganismos se denominan ácido-alcohol resistentes
parciales o débiles.
El frotis se tiñe durante unos 5 min con Carbolfucsina aplicando calor

suave. Lavar con agua. Decolorar con alcohol etílico 95% con un 3% de
ClH concentrado. Lavar y teñir durante 30-60 seg con Azul de Metileno
(color de contraste). Lavar y secar
BLANCO DE CALCOFLÚOR
Las paredes celulares de los hongos fijan el colorante blanco de calcoflúor

aumentando considerablemente su visibilidad en los tejidos y otras
muestras. Según fue descrito por Hageage y Harrington, este colorante
se emplea en lugar de KOH al 10% para el examen inicial de los materiales
clínicos. También se emplea para aumentar la visualización de los
elementos morfológicos de los cultivos puros de los hongos. En algunos
laboratoríos ha suplantado al azul de lactofenol en muchas aplicaciones.
Los organismos fluorescen con luz blanco-azulada o verde manzana,
según la fuente luminosa que se utilice.
TINCIÓN AURAMINA RODAMINA

La técnica Tinción Auramina Rodamina es utilizada para visualizar los
bacilos utilizando Microscopía de fluorescencia. Esta tinción implica
el uso de los colorantes fluorescentes Auramina y Rodamina que
pueden ser utilizados también para detectar bacilos ácido alcohol
resistente utilizando microscopia electrónica.
“Los ácidos micólicos son un tipo de ácidos grasos que están presentes en las paredes
celulares de las micobacterias, entre ellas Mycobacterium tuberculosis, agente infeccioso
que causa la tuberculosis humana”.
Indicaciones:
 Las muestras que pueden ser funcionales para esta tinción
son:
o
Esputo
o
Lavados bronquiales
o
Jugo gástrico
o
Orina
o
Líquidos estériles. (Muestra tomada en frasco
limpio, estéril)
 Las muestras deberán ser de 3 ml cada una.
 No requiere ayuno.
 Para lograr una estabilidad adecuada la muestra puede
mantenerse en refrigeración a una temperatura de cuatro
grados centígrados en un tiempo no mayor de 24 horas.
 La toma de muestras será de lunes a domingo.
 Los resultados serán entregados el mismo día.

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MICROORGANISMOS Y TINCIÓN ACIDORRESISTENTE

Los ácidos micólicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen

Un aspecto importante de la coloración rodamina-auramiria es que luego

El fluorocromo naranja de acridina se une al ácido nucleico ya sea en su

Las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos

Se ha desarrollado una coloración de ácido-alcohol resistencia modificada

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Las paredes celulares de los hongos fijan el colorante blanco de calcoflúor

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